可分为梅毒螺旋体检查、梅毒血清试验和脑脊液检查。
一、梅毒螺旋体检查
1、暗视野显微镜检查，在皮损处，用玻片刮取组织渗出液或淋巴结穿刺液，见有活动的梅毒螺旋体。
2、免疫荧光染色，在荧光显微镜下可见绿色的梅毒螺旋体。
3、银染色，从内脏或皮损中检出梅毒螺旋体，但不特异。
二、梅毒血清试验
根据所用抗原不同，梅毒血清试验分为下列两大类：
1、非梅毒螺旋体抗原血清试验 用心磷脂作抗原，测定血清中抗心磷脂抗体，亦称反应素。本试验敏感性高而特异性较低，且易发生生物学假阳性。目前一般作为筛选和定量试验，观察疗效、复发及再感染。
1)性病研究实验室试验(venereal disease research laboratory test，VDRL)此法常用，操作简单，需用显微镜读取结果，缺点是对一期梅毒敏感性不高。
2)快速血浆反应素试验(rapid plasma reagin test，RPR) 是VDRL抗原的改良，
敏感性及特异性与VDRL相似，优点是肉眼即可读出结果。
3)血清不加热反应素试验(unheated serum reagin test,USR) 也是 VDRL抗原
的改良，敏感性及特异性与 VDRL相似。
2、梅毒螺旋体抗原血清试验
用活的或死的梅毒螺旋体或其成分来作抗原测定抗螺旋体抗体。这种试验敏感性和特异性均高，一般用作证实试验。由于这种试验检测的抗梅责螺旋体G抗体，即使患者经过足够治疗，血清反应仍持续阳性，因此不能用于观察疗效、复发和再感染。
1)荧光螺旋体抗体吸收实验。（fluorescent treponemal antibody-absorption test, FTA-ABS) 此法是最敏感和最特异的螺旋体试验。
2)梅毒螺旋体血凝试验(treponema pallidum hemagglutination assay,TPHA) 敏
感性和特异性均高，操作简便，但对一期梅毒不如FTAABS试验敏感。
3)梅毒螺体荧光抗体双染色试验(FTA-ABS double staining，FTA-ABS-DS)本试验是用Nichol株梅毒螺旋体作抗原用四甲基异硫氰酸若丹明结合的抗人体球蛋白血清及FITC结合的抗梅毒螺旋球蛋白双重染色，用间接免疫荧光技术检测血清中的抗 TPIgG抗体。FTA-ABS-DS法无论对早期梅毒或晚期梅毒患者都有很高的敏感性和特异性，且阳性出现时间早。
4)酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)月用Nichol 株
为抗原，以超声波击碎。此法可用于各期梅毒诊断，与荧光抗体双染色法(FTA-ABS- DS)比较，2法符合率为96%。
5)免疫印迹技术(Western immunoblotting) 将梅毒螺旋体(Nichol 株)菌体细胞用SDS破碎，并用SDS-PAGE 将菌体抗原成分分离成许多区带，这些抗原成分通过电泳转移全部吸附在硝酸纤维素滤膜上，最后利用酶标技术检测病人血清中的梅毒特异性抗体。免疫印迹法的特异性高于荧光密螺旋体吸附试验(FTA-ABS法)与密螺旋体血凝试验(TPHA法)。
3、分子生物学技术检测梅毒螺旋体，应用多聚酶链式反应(polymerase chain re- action,PCR)，从选择的材料扩增选择螺旋体DNA序列，从而使经选择的螺旋体DNA拷贝数量增加，能够用特异探针来进行检测。PCR诊断先天神经梅毒具有一定的敏感性和特异性。
4、全面分析梅毒血清试验梅毒血清试验对梅毒的诊断及追踪观察有重要意义但并非是唯一的依据。梅毒血清试验在一些疾病中可出现生物学假阳性，如流行性感冒、结核、疟疾、肝硬化、系统性红斑狼疮、肺炎、瘤型麻风、恶性肿瘤，少数孕妇和老人也可发生。此外，尚有血清试验假阴性，一般硬下疳发生2~3周才出现反应素，故早期反应常是阴性；二期梅毒约有1%患者未稀释的血清VDRL呈阴性，即为前滞现象(prozone phenomenon)。而高度稀释后反而为阳性。
三、脑脊液(CSF)检查
用于诊断神经梅毒，包括细胞计数、蛋白量、VDRL试验，胶体金试验等。对神经梅毒患者来说，CSF的 VDRL特异性很强，但敏感性低，可有阴性结果，而FTA-ABS特异性较VDRL差，但敏感性却较好。脑脊液 VDRL 是脑脊液中的标准血清方法，其阳性应考虑为神经梅毒。
【诊断】
根据病史、体检和实验室检查，综合分析判断。病史包括不洁性交史，患梅毒及其他性病史，婚姻及配偶状况，分娩史，验血史，治疗史。如系先天梅毒，应包括父母、兄弟、姐妹的患病情况，必要时可作试验治疗。
【鉴别诊断】
1、一期梅毒 硬下疳应与软下疳(见软下疳)、固定性药疹、生殖器疱疹鉴别。
2、毒皮疹多种多样，可模拟多种皮肤病的皮疹。其中玫瑰疹应与玫瑰糠 疹鉴别；扁平湿疣应与尖锐湿疣鉴别；其他梅毒疹应与白癜风、药疹、银屑病、扁平苔藓、毛囊炎、脓疱疮、鹅口疮鉴别。
3、三期梅毒结节性梅毒疹应与寻常狼疮、瘤型麻风鉴别；树胶肿应与寻常狼疮、瘤型麻风、硬结性红斑、溃疡、癌肿鉴别。
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